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液体活检作为一种非侵入性肿瘤检测手段受到了越来越多的关注，主要检测肿瘤或转移灶在血液中释放的游离DNA（Cell-free DNA,cfDNA），对肿瘤特定基因型进行分析。这种血液基因检测可以为癌症治疗的临床决策提供依据。对晚期非小细胞癌患者（NSCLC）来说，快速准确的EGFR、ALK和ROS1基因突变检测对治疗方案的选择或更换至关重要，液体活检可以避免常规组织学分析中存在的检测时间慢、被检组织量少等问题。但从血液中检测基因突变的可靠性和实用性到底如何，仍需要大量的临床实践来检验。

近日，来自美国哈佛大学医学院Dana-Farber癌症研究所的Adrian G. Sacher团队开展了一项前瞻性验证研究，旨在分析血浆微滴式PCR（Droplet Digital PCR , ddPCR）用于快速检测EGFR和KRAS基因突变，以及EGFR T790M耐药突变的可行性。研究结果2016年4月7日在线发表于JAMA Oncology杂志。

主要研究内容

研究时间自2014年7月3日至2015年6月30日。

入组患者需要满足以下要求：

◇年龄≥18岁

◇病理活检证实为进展期或复发性非鳞状NSCLC

◇新确诊的患者（cohort 1）

◇EGFR TKI耐药的患者（cohort 2）

◇准备接受新的全身治疗

◇有肿瘤组织样本或准备重复穿刺活检

◇放射影像学可证实病灶存在

对入组研究的患者采取血液样本，分离血浆。使用ddPCR分析平台检测血浆中的循环肿瘤DNA，在cohort 1组中检测EGFR基因exon 19del、L858R和KRAS基因G12X；在cohort 2组中检测EGFR基因exon 19del、L858R、T790M。

主要研究结果

入组的180例进展期NSCLC患者中，女性112例（62%），男性68例（38%）。中位年龄62岁（37-93）。新确诊患者（cohort 1）120例，获得性EGFR耐药（cohort 2）60例。

肿瘤基因型包括：80例EGFR基因exon 19/L858R突变，35例EGFR基因耐药突变T790M，25例KRAS G12X突变。血浆ddPCR中位检测时间（TAT）为3天，而肿瘤组织基因检测中位时间在cohort 1组为12天，在cohort 2组为27天。

从上图可以看出，血浆ddPCR检测阳性预测值（PPV）在EGFR基因exon 19 del、L858R和KRAS基因均为100%，而在EGFR基因T790M为79%。敏感性在EGFR基因exon 19 del为82%，L858R为74%，T790M为77%，而KRAS基因为64%。

多处转移和肝转移、骨转移的患者中，血浆ddPCR检测EGFR和KRAS基因突变的敏感性更高。

结语

从上述研究可以发现，微滴式数字PCR从血浆中检测肿瘤特定基因类型将来或可在进展期NSCLC中发挥重要作用。这一新型检测技术能够快速检测EGFR和KRAS基因突变，假阳性率低、稳定性良好。对于不愿接受重复活检的靶向耐药肺癌患者，ddPCR检查提供了另外一种选择。但ddPCR不能完全代替病理活检，两者的检查结果在临床中可以相互补充。

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文献来源：Adrian G. Sacher. Prospective Validation of Rapid Plasma Genotyping for the Detection of EGFR and KRAS Mutations in Advanced Lung Cancer. JAMA Oncol. Apr 7 ,2016. [PMID: 27055085]